完好的
人ELISA試劑盒包含哪些組分呢?
在人ELISA試劑盒實驗中,只需遵從它應(yīng)有的規(guī)矩才干更好的完成實驗,對此,為您分析了保證實驗效果的幾大基礎(chǔ):
1.要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復到室溫,以使效果更安穩(wěn)。
2.實驗時,要使底物避光保存。
3.用槍羅致液體時速度不能太快,避免發(fā)作氣泡而使羅致量不。
4.羅致液體時,要用量程和需要量靠近的槍去吸,削減過失。
5.要保證移液槍的性,過失不能超過2%。可用水和電子天平進行確認。但有專。人員進行糾正。
6.要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。羅致不同的液體后,要更換槍頭。即使是羅致標準品時。
ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等
完好的人ELISA試劑盒包含以下各組分:
1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
2.酶符號的抗原或抗體(結(jié)合物);
3.酶的底物;
4.陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考規(guī)范品和控制血清(定量測定中);
5.結(jié)合物及標本的稀釋液;
6.洗刷液
7.酶反響停止液。
人ELISA試劑盒操作過程:
1. 加規(guī)范品:在酶標包被板上設(shè)規(guī)范品孔,依次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(主張每個濃度做2個平行孔)
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔參加酶標試劑50μl。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:ELISA試劑盒每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。